ריין סאַפּאָשניקאָוויאַ דיוואַריקאַטאַ ייל פֿאַר ליכט און זייף מאכן כאָולסייל דיפפוסער יקערדיק ייל נייַ פֿאַר ראָר בורנער דיפפוסערס

קורץ באַשרייַבונג:

 

2.1. צוגרייטונג פון SDE

די רייזאָומז פון סד זענען געקויפט ווי אַ דאַר קרייַטעכץ פון Hanherb קאָו (גורי, קארעע). די פאַבריק מאַטעריאַלס זענען טאַקסאָנאָמיקאַללי באשטעטיקט דורך ד"ר Go-Ya Choi פון די קארעע אינסטיטוט פון מיזרעכדיק מעדיסינע (KIOM). א וואַוטשער ספּעסאַמאַן (נומער 2014 SDE-6) איז דאַפּאַזיטיד אין די קאָרעיִש הערבאַריום פון נאָרמאַל הערבאַל רעסאָורסעס. דאַר רייזאָומז פון סד (320 ג) זענען יקסטראַקטיד צוויי מאָל מיט 70% עטאַנאָל (מיט אַ 2 ה רעפלוקס) און די עקסטראַקט איז דעמאָלט קאַנסאַנטרייטאַד אונטער רידוסט דרוק. די דעקאָקטיאָן איז פילטערד, ליאָפיליזעד און סטאָרד בייַ 4 °C. די טראָגן פון דאַר עקסטראַקט פון גראָב סטאַרטינג מאַטעריאַלס איז געווען 48.13% (וו / וו).

 

2.2. קוואַנטיטאַטיווע הויך-פאָרשטעלונג פליסיק טשראָמאַטאָגראַפי (הפּלק) אַנאַליסיס

טשראָמאַטאָגראַפיק אַנאַליסיס איז דורכגעקאָכט מיט אַ HPLC סיסטעם (Waters Co., Milford, MA, USA) און אַ פאָטאָדיאָדע מענגע דעטעקטאָר. פֿאַר די HPLC אַנאַליסיס פון SDE,O-גלוקאָסילסימייפוגין נאָרמאַל איז פּערטשאַסט פון די קארעע פּראָמאָטיאָן אינסטיטוט פֿאַר טראַדיציאָנעל מעדיסינע ינדאַסטרי (Gyeongsan, קארעע), אוןסעק-אָגלוקאָסילהאַמאַודאָל און 4′-O-β-ד-גלוקאָסיל-5-O-מעטהילוויסאַממינאָל זענען אפגעזונדערט אין אונדזער לאַבאָראַטאָריע און יידענאַפייד דורך ספּעקטראַל אַנאַליזעס, בפֿרט דורך NMR און MS.

SDE סאַמפּאַלז (0.1 מג) זענען צעלאָזן אין 70% עטאַנאָל (10 מל). טשראָמאַטאָגראַפיק צעשיידונג איז דורכגעקאָכט מיט אַ XSelect HSS T3 C18 זייַל (4.6 × 250 מם, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). די רירעוודיק פאַסע קאָנסיסטעד פון אַסעטאָניטרילע (א) און 0.1% אַסעטיק זויער אין וואַסער (ב) מיט אַ לויפן קורס פון 1.0 מל / מין. א מולטיסטעפּ גראַדיענט פּראָגראַם איז געניצט ווי גייט: 5% א (0 מין), 5-20% א (0-10 מינוט), 20% א (10-23 מינוט), און 20-65% א (23-40 מינוט) ). די דיטעקשאַן ווייוולענגט איז סקאַנד בייַ 210-400 נם און רעקאָרדעד אין 254 נם. די ינדזשעקשאַן באַנד איז געווען 10.0μל. סטאַנדאַרד סאַלושאַנז פֿאַר די באַשטימונג פון דרייַ טשראָמאָנעס זענען צוגעגרייט אין אַ לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון 7.781 מג / מלOגלוקאָסילסימיפיגין), 31.125 מג / מל (4′-O-β-ד-גלוקאָסיל-5-O-מעטהילוויסאַממינאָל), און 31.125 מג / מל (סעק-אָ-גלוקאָסילהאַמאַודאָל) אין מעטאַנאָל און געהאלטן בייַ 4 °C.

2.3. אָפּשאַצונג פון אַנטי-ינפלאַמאַטאָרי אַקטיוויטעטאין וויטראָ

2.3.1. צעל קולטור און מוסטער באַהאַנדלונג

RAW 264.7 סעלז זענען באקומען פון די אמעריקאנער טיפּ קולטור קאַלעקשאַן (ATCC, Manassas, VA, USA) און דערוואַקסן אין DMEM מיטל מיט 1% אַנטיביאַטיקס און 5.5% FBS. סעלז זענען ינקובייטיד אין אַ כיומידיד אַטמאָספער פון 5% CO2 ביי 37 ° C. צו סטימולירן די סעלז, די מיטל איז ריפּלייסט מיט פריש דמעם מיטל און ליפּאָפּאָליסאַקשאַרידע (לפּס, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) אין קסנומקס.μג / מל איז צוגעגעבן אין דעם בייַזייַן אָדער אַוועק פון SDE (200 אָדער 400μג / מל) פֿאַר נאָך 24 שעה.

2.3.2. באַשטימונג פון ניטריק אַקסייד (קיין), פּראָסטאַגלאַנדין E2 (PGE2), טומאָר נעקראָסיס פאַקטאָר-α(TNF-α), און ינטערלעוקין-6 (יל-6) פּראָדוקציע

סעלז זענען באהאנדלט מיט SDE און סטימיאַלייטאַד מיט לפּס פֿאַר 24 שעה. קיין פּראָדוקציע איז אַנאַלייזד דורך מעסטן ניטריטע ניצן די Griess רייידזשאַנט לויט צו אַ פריערדיקן לערנען [12]. ויסשיידונג פון די ינפלאַמאַטאָרי סיטאָקינעס PGE2, TNF-α, און IL-6 איז געווען באשלאסן ניצן אַן עליסאַ קיט (ר & די סיסטעמען) לויט צו פאַבריקאַנט ינסטראַקשאַנז. די יפעקץ פון SDE אויף NO און סיטאָקינע פּראָדוקציע זענען באשלאסן ביי 540 nm אָדער 450 nm ניצן אַ Wallac EnVision™מיקראָפּלאַטע לייענער (פּערקיןעלמער).

2.4. עוואַלואַטיאָן פון אַנטיאָסטעאָאַרטהריטיס אַקטיוויטעטאין וויוואָו

2.4.1. אַנימאַלס

זכר Sprague-Dawley ראַץ (7 וואָכן אַלט) זענען געקויפט פון Samtako ינק. (אָסאַן, קארעע) און כאַוזד אונטער קאַנטראָולד טנאָים מיט אַ 12-ה ליכט / פינצטער ציקל אין°C און% הומידיטי. ראַץ זענען צוגעשטעלט מיט אַ לאַבאָראַטאָריע דיעטע און וואַסעראַד ליבע. אַלע יקספּערמענאַל פּראָוסידזשערז זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט די נאַשאַנאַל ינסטיטוטעס פון געזונט (NIH) גיידליינז און באוויליקט דורך די אַנימאַל קער און נוצן קאַמיטי פון די דאַעדזשעאָן אוניווערסיטעט (Daejeon, רעפּובליק פון קארעע).

2.4.2. ינדאַקשאַן פון אָאַ מיט מיאַ אין ראַץ

די אַנימאַלס זענען ראַנדאַמייזד און אַסיינד צו באַהאַנדלונג גרופּעס איידער די אָנהייב פון די לערנען (פּער גרופּע). MIA לייזונג (3 מג / 50μל פון 0.9% סאַלין) איז גלייַך ינדזשעקטיד אין די ינטראַ-אַרטיקולאַר פּלאַץ פון די רעכט קני אונטער אַניסטיזשאַ ינדוסט מיט אַ געמיש פון קעטאַמינע און קסילאַזינע. ראַץ זענען צעטיילט ראַנדאַמלי אין פיר גרופּעס: (1) די סאַלין גרופּע אָן מיאַ ינדזשעקשאַן, (2) די מיאַ גרופּע מיט מיאַ ינדזשעקשאַן, (3) די SDE-באהאנדלט גרופּע (200 מג / קג) מיט מיאַ ינדזשעקשאַן, און (4) ) די ינדאָמעטהאַסין- (ימ-) באהאנדלט גרופּע (2 מג / קג) מיט מיאַ ינדזשעקשאַן. ראַץ זענען אַדמינאַסטערד אָראַל מיט SDE און IM 1 וואָך איידער MIA ינדזשעקשאַן פֿאַר 4 וואָכן. די דאָוסאַדזש פון SDE און IM געניצט אין דעם לערנען איז באזירט אויף די אָנגעשטעלטע אין פרייַערדיק שטודיום.10,13,14].

2.4.3. מעזשערמאַנץ פון הינדפּאַו ווייט שייַכעס פאַרשפּרייטונג

נאָך אָאַ ינדאַקשאַן, דער אָריגינעל וואָג אין וואָג-שייַכעס פיייקייט פון הינדפּאַז איז דיסראַפּטיד. אַ ינקאַפּאַסיטאַנס טעסטער (לינטאָן ינסטראַמענטיישאַן, נאָרפאָלק, וק) איז געניצט צו אָפּשאַצן ענדערונגען אין די וואָג-שייַכעס טאָלעראַנץ. ראַץ זענען קערפאַלי געשטעלט אין די מעסטן קאַמער. די וואָג-שייַכעס קראַפט יגזערטיד דורך די הינד ענדגליד איז אַוורידזשד איבער אַ 3 s פּעריאָד. די וואָג פאַרשפּרייטונג פאַרהעלטעניש איז קאַלקיאַלייטיד דורך די פאלגענדע יקווייזשאַן: [וואָג אויף רעכט הינד ענדגליד / (וואָג אויף רעכט הינד ענדגליד + וואָג אויף לינקס הינד ענדגליד)] × 100 [15].

2.4.4. מעזשערמאַנץ פון סערום סיטאָקינע לעוועלס

די בלוט סאַמפּאַלז זענען סענטריפוגעד בייַ 1,500 ג פֿאַר 10 מינוט בייַ 4 °C; דערנאָך די סערום איז געזאמלט און סטאָרד בייַ -70 ° C ביז נוצן. די לעוועלס פון IL-1β, IL-6, TNF-α, און PGE2 אין די סערום זענען געמאסטן ניצן ELISA קיץ פון ר & די סיסטעמס (מיננעאַפּאָליס, מן, USA) לויט צו פאַבריקאַנט ינסטראַקשאַנז.

2.4.5. פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיווע רט-פּקר אַנאַליסיס

גאַנץ רנאַ איז יקסטראַקטיד פון קני שלאָס געוועב מיט די TRI רעאַגענט® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), פאַרקערט טראַנסקריבעד אין קדנאַ און פּקר-אַמפּלאַפייד ניצן אַ TM One Step RT פּקר קיט מיט SYBR גרין (אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס). , גראַנד אינזל, ניו יאָרק, USA). פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז דורכגעקאָכט מיט די אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס 7500 פאַקטיש-צייט פּקר סיסטעם (אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס, גראַנד אינזל, ניו יאָרק, USA). די אָנפאַנגער סיקוואַנסיז און די זאָנד סיקוואַנס זענען געוויזן אין טאַבלע1. אַליקוואַץ פון מוסטער קדנאַ און אַן גלייך סומע פון ​​​​GAPDH cDNA זענען אַמפּלאַפייד מיט די TaqMan® וניווערסאַל פּקר בעל געמיש מיט דנאַ פּאָלימעראַסע לויט צו פאַבריקאַנט ינסטראַקשאַנז (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). פּקר טנאָים זענען 2 מינוט ביי 50 °C, 10 מינוט ביי 94 °C, 15 ס ביי 95 °C, און 1 מינוט ביי 60 °C פֿאַר 40 סייקאַלז. די קאַנסאַנטריישאַן פון ציל דזשין איז באשלאסן מיט די קאָמפּאַראַטיווע Ct (שוועל ציקל נומער אין קרייַז-פונט צווישן אַמפּלאַפאַקיישאַן פּלאַנעווען און שוועל) אופֿן, לויט צו פאַבריקאַנט ינסטראַקשאַנז.

FOB פּרייַז:$ 0.5 - 9,999 / שטיק

מינימום סדר קוואַנטיטי:100 פּיס / פּיעסעס

צושטעלן אַביליטי:10000 שטיק / פּיעס פּער חודש