ריין סאַפּאָשניקאָוויאַ דיוואַריקאַטאַ אָיל פֿאַר ליכט און זייף מאכן כאָולסייל דיפיוזער עסענטשאַל אָיל נייַ פֿאַר ריד ברענער דיפיוזערז

קורצע באַשרייַבונג:

 

2.1. צוגרייטונג פון SDE

די רייזאָמען פון SD זענען געקויפט געוואָרן ווי אַ טרוקענע קרויט פון האַנהערב קאָ. (גורי, קארעע). די פלאַנצן מאַטעריאַלן זענען באַשטעטיקט געוואָרן טאַקסאָנאָמיש דורך ד"ר גאָ-יאַ טשוי פון די קארעע אינסטיטוט פון אָריענטאַל מעדיצין (KIOM). א וואַוטשער ספּעסאַמאַן (נומער 2014 SDE-6) איז דעפּאָנירט געוואָרן אין די קאָרעיִשע הערבאַריום פון סטאַנדאַרד הערבאַל רעסורסן. טרוקענע רייזאָמען פון SD (320 ג) זענען עקסטראַקטירט געוואָרן צוויי מאָל מיט 70% עטאַנאָל (מיט אַ 2 שעה רעפלוקס) און דער עקסטראַקט איז דערנאָך קאָנצענטרירט געוואָרן אונטער רעדוצירטן דרוק. די דעקאָקציע איז געפילטערט געוואָרן, ליאָפיליזירט און געהאלטן ביי 4°C. די פּראָדוקציע פון ​​טרוקענעם עקסטראַקט פון רויע סטאַרטינג מאַטעריאַלן איז געווען 48.13% (w/w).

 

2.2. קוואַנטיטאַטיווע הויך-פּערפאָרמאַנס פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע (HPLC) אַנאַליז

כראָמאַטאָגראַפֿישע אַנאַליז איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיט אַ HPLC סיסטעם (וואָטערס קאָו., מילפֿאָרד, מאַסאַטשוסעטס, USA) און אַ פֿאָטאָדיאָוד אַרעי דעטעקטאָר. פֿאַר דער HPLC אַנאַליז פֿון SDE, די פּרימ-O-גלוקאָסילסימיפוגין סטאַנדאַרט איז געקויפט געוואָרן פֿון דעם קאָרעיִשן פּראָמאָציע אינסטיטוט פֿאַר טראַדיציאָנעלער מעדיצין אינדוסטריע (גיעאָנגסאַן, קאָרעיִש), אוןסעק-אָ-גלוקאָסילהאַמאַודאָל און 4′-O-β-ד-גלוקאָסיל-5-O-מעטהילוויסאַמינאָל זענען אפגעזונדערט געוואָרן אין אונדזער לאַבאָראַטאָריע און אידענטיפֿיצירט דורך ספּעקטראַלע אַנאַליזעס, בפֿרט דורך NMR און MS.

SDE מוסטערן (0.1 מג) זענען אויפגעלייזט געוואָרן אין 70% עטאַנאָל (10 מל). כראָמאַטאָגראַפֿישע צעשיידונג איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיט אַן XSelect HSS T3 C18 קאָלום (4.6 × 250 מם, 5μm, וואָטערס קאָו., מילפֿאָרד, מאַ, USA). די מאָבילע פֿאַזע איז באַשטאַנען פֿון אַצעטאָניטריל (A) און 0.1% עסיק זויער אין וואַסער (B) מיט אַ פֿלוס-ראַטע פֿון 1.0 mL/min. אַ מולטיסטעפּ גראַדיענט פּראָגראַם איז געניצט געוואָרן ווי פֿאָלגט: 5% A (0 מינוט), 5–20% A (0–10 מינוט), 20% A (10–23 מינוט), און 20–65% A (23–40 מינוט). די דעטעקציע כוואַליע-לענג איז געסקענט געוואָרן ביי 210–400 נם און רעקאָרדירט ​​ביי 254 נם. דער אינדזשעקשאַן וואָלומען איז געווען 10.0μל. סטאַנדאַרט לייזונגען פֿאַר דער באַשטימונג פון דריי כראָמאָנען זענען צוגעגרייט געוואָרן ביי אַ לעצט קאָנצענטראַציע פון ​​7.781 מג/מל (פּרימ-O-גלוקאָסילסימיפוגין), 31.125 מג/מל (4′-O-β-ד-גלוקאָסיל-5-O-מעטילוויסאַמינאָל), און 31.125 מג/מל (סעק-אָ-גלוקאָסילהאַמאַודאָל) אין מעטאַנאָל און געהאַלטן ביי 4°C.

2.3. אפשאצונג פון אנטי-אינפלאמאטארישע טעטיקייטאין וויטראָ

2.3.1. צעל קולטור און מוסטער באַהאַנדלונג

רויע 264.7 צעלן זענען באקומען געוואָרן פֿון דער אַמעריקאַנער טיפּ קולטור קאָלעקציע (ATCC, מאַנאַסאַס, ווירדזשיניע, USA) און געוואַקסן אין DMEM מעדיום וואָס האָט ענטהאַלטן 1% אַנטיביאָטיקס און 5.5% FBS. צעלן זענען אינקובירט געוואָרן אין אַ פֿײַכטיקטער אַטמאָספֿערע פֿון 5% CO2 בײַ 37°C. כּדי צו סטימולירן די צעלן, איז דער מעדיום ערזעצט געוואָרן מיט פֿרישן DMEM מעדיום, און ליפּאָפּאָליסאַקאַריד (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) בײַ 1μג/מל איז צוגעגעבן געוואָרן אין דער אנוועזנהייט אָדער אָפּוועזנהייט פון SDE (200 אָדער 400μג/מל) פֿאַר נאָך 24 שעה.

2.3.2. באַשטימונג פון ניטריק אָקסייד (NO), פּראָסטאַגלאַנדין E2 (PGE2), טומאָר נעקראָזיס פאַקטאָר-α(TNF-α), און אינטערלויקין-6 (IL-6) פּראָדוקציע

צעלן זענען באהאנדלט געוואָרן מיט SDE און סטימולירט מיט LPS פֿאַר 24 שעה. NO פּראָדוקציע איז אַנאַליזירט געוואָרן דורך מעסטן ניטריט ניצנדיק דעם Griess רעאַגענט לויט אַ פריערדיקער שטודיע [12]. סעקרעציע פון ​​די ענטצינדלעכע ציטאקינען PGE2, TNF-α, און IL-6 איז באַשטימט געוואָרן מיט אַן ELISA קיט (R&D סיסטעמען) לויט די אינסטרוקציעס פֿונעם פאַבריקאַנט. די ווירקונגען פֿון SDE אויף NO און ציטאָקין פּראָדוקציע זענען באַשטימט געוואָרן ביי 540 נאַנאָמעטער אָדער 450 נאַנאָמעטער מיט אַ Wallac EnVision.™מיקראָפּלאַטע לייענער (פּערקין-עלמער).

2.4. אפשאצונג פון אנטי-אסטעאארטריט טעטיקייטאין וויוואָ

2.4.1. חיות

זכר ספּראַג-דאַולי ראַץ (7 וואָכן אַלט) זענען געקויפט געוואָרן פון סאַמטאַקאָ ינק. (אָסאַן, קארעע) און געהאַלטן אונטער קאָנטראָלירטע באַדינגונגען מיט אַ 12-שעה ליכט/פינסטער ציקל ביי°C און% הומידיטי. ראַץ זענען געגעבן געוואָרן אַ לאַבאָראַטאָריע דיעטע און וואַסעראָן קיין פראבלעםאַלע עקספּערימענטאַלע פּראָצעדורן זענען דורכגעפירט געוואָרן אין לויט מיט די נאַציאָנאַלע אינסטיטוטן פון געזונט (NIH) גיידליינז און באַשטעטיקט דורך די אַנימאַל קער און נוצן קאמיטעט פון דער דאַעדזשאָן אוניווערסיטעט (דאַעדזשאָן, רעפובליק פון קארעע).

2.4.2. אינדוקציע פון ​​OA מיט MIA אין ראַץ

די חיות זענען ראַנדאָמיזירט געוואָרן און צוגעטיילט צו באַהאַנדלונג גרופּעס איידער די אָנהייב פון דער שטודיע (פּער גרופּע). MIA לייזונג (3 מג/50μליטער פון 0.9% זאַלץ לייזונג) איז גלייך אינדזשעקטירט געוואָרן אין דעם אינטראַ-אַרטיקולאַרן פּלאַץ פון דעם רעכטן קני אונטער אַנעסטעזיע אינדוצירט מיט אַ געמיש פון קעטאַמין און קסילאַזין. ראַץ זענען ראַנדאָם צעטיילט געוואָרן אין פיר גרופּעס: (1) די זאַלץ לייזונג גרופּע אָן קיין MIA אינדזשעקשאַן, (2) די MIA גרופּע מיט MIA אינדזשעקשאַן, (3) די SDE-באַהאַנדלטע גרופּע (200 מג/קג) מיט MIA אינדזשעקשאַן, און (4) די אינדאָמעטאַסין- (IM-) באַהאַנדלטע גרופּע (2 מג/קג) מיט MIA אינדזשעקשאַן. ראַץ זענען געגעבן געוואָרן מויל מיט SDE און IM 1 וואָך איידער MIA אינדזשעקשאַן פֿאַר 4 וואָכן. די דאָזע פון ​​SDE און IM געניצט אין דעם לערנען איז געווען באַזירט אויף די וואָס זענען געניצט געוואָרן אין פריערדיקע שטודיעס [10,13,14].

2.4.3. מעסטונגען פון הינטער-פאו וואָג-טראָגנדיקע פאַרשפּרייטונג

נאך OA אינדוקציע, איז די ארגינעלע באלאנס אין וואָג-טראָגנדיקע פעאיקייט פון די הינטערשטע פּאָטעס געוואָרן צעשטערט. אן אומקאַפּאַסיטאַנס טעסטער (לינטאָן אינסטרומענטאַציע, נאָרפאָלק, פֿאַראייניקטע קעניגרייך) איז גענוצט געוואָרן צו אָפּשאַצן ענדערונגען אין דער וואָג-טראָגנדיקער טאָלעראַנץ. ראַץ זענען פֿאָרזיכטיק געשטעלט געוואָרן אין דער מעסט-קאַמער. די וואָג-טראָגנדיקע קראַפט אויסגעאיבט דורך די הינטערשטע גליד איז דורכשניטלעך געוואָרן איבער אַ 3 סעקונדעס פּעריאָד. די וואָג פאַרשפּרייטונג פאַרהעלטעניש איז קאַלקולירט געוואָרן דורך די פאלגענדע גלייכונג: [וואָג אויף רעכט הינטערשטן גליד/(וואָג אויף רעכט הינטערשטן גליד + וואָג אויף לינקן הינטערשטן גליד)] × 100 [15].

2.4.4. מעסטונגען פון סערום ציטאקין לעוועלס

די בלוט מוסטערן זענען סענטריפוגירט געוואָרן ביי 1,500 ג פֿאַר 10 מינוט ביי 4°C; דערנאָך איז די סערום געזאַמלט און געהאַלטן געוואָרן ביי −70°C ביז נוצן. די לעוועלס פון IL-1β, IL-6, TNF-α, און PGE2 אין סערום זענען געמאסטן געווארן מיט ELISA קיץ פון R&D סיסטעמס (מינעאַפּאָליס, MN, USA) לויט די אינסטרוקציעס פונעם פאַבריקאַנט.

2.4.5. רעאַל-צייט קוואַנטיטאַטיווע RT-PCR אַנאַליז

גאַנץ RNA איז עקסטראַקטירט געוואָרן פֿון קני-געלענק געוועב מיטן TRI רעאַגענט® (Sigma-Aldrich, סעינט לואיס, מאָ, USA), ריווערס-טראַנסקריבירט אין cDNA און PCR-אַמפּליפֿיצירט מיטן TM One Step RT PCR קיט מיט SYBR גרין (Applied Biosystems, גראַנד איילענד, ניו יאָרק, USA). רעאַל-צייט קוואַנטיטאַטיווע PCR איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיטן Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR סיסטעם (Applied Biosystems, גראַנד איילענד, ניו יאָרק, USA). די פּריימער סיקוואַנסן און די פּראָבע-סיקוואַנס ווערן געוויזן אין טאַבעלע.1אַליקוואָטן פון מוסטער cDNAs און אַ גלייכע מאָס פון GAPDH cDNA זענען אַמפּליפיצירט געוואָרן מיט די TaqMan® Universal PCR מאַסטער געמיש וואָס ענטהאַלט DNA פּאָלימעראַזע לויט די פאַבריקאַנט אינסטרוקציעס (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR באדינגונגען זענען געווען 2 מינוט ביי 50°C, 10 מינוט ביי 94°C, 15 סעקונדעס ביי 95°C, און 1 מינוט ביי 60°C פֿאַר 40 ציקלען. די קאָנצענטראַציע פון ​​ציל גען איז באַשטימט געוואָרן מיט די קאָמפּאַראַטיווע Ct (טרעשאָולד ציקל נומער ביי קראָס-פּוינט צווישן אַמפּליפיקאַציע פּלאָץ און טרעשאָולד) מעטאָד, לויט די פאַבריקאַנט אינסטרוקציעס.

פאָב פּרייַז:0.5$ - 9,999$ / שטיק

מינימום אָרדער קוואַנטיטי:100 שטיק/שטיקלעך

צושטעלן פיייקייט:10000 שטיק/שטיקלעך פּער חודש